Quantitative PCR (qPCR) - Grundlagen, Durchführung, Interpretation und Troubleshooting - Seminar / Kurs von Dr. Klinkner & Partner GmbH

Inhalte

17.11.2020 | Quantitative PCR (qPCR) - Grundlagen, Durchführung, Interpretation und Troubleshooting | WinterqPCR Grundlagen
  • Funktionsprinzip einer qPCR
  • Vergleich PCR (Northern Blot), qPCR mit Stärken und Schwächen
  • Funktionsprinzip der verschiedenen Detektionsreagenzien (Farbstoff, Sonde)
  • Anwendungsfälle einer qPCR mit kurzen Beispielen anhand von Kundenfällen
  • Wo macht es Sinn, wo nicht?
Gängige qPCR-Geräte und -VerbrauchsmaterialienTypische Kosten eines qPCR-Assays
  • Kostenvergleich mit End-Punkt PCR, NGS
qPCR-Parameter
  • Phasen, Cq, Fluoreszenz
Schmelzkurven
  • Wie und warum?
Wie werden Proben miteinander verglichen?qPCR Assay Design
  • Wie designe/etabliere ich einen qPCR-Assay?
  • Worauf muss ich bei einer reversen Transkription achten?
  • Primer, Amplikons
MultiplexingNotwendige KontrollenReferenzgene - How ToProtokoll und Handling eines qPCR-Assays1-Step vs. 2-Step qPCRqPCR Assay Validation
  • Was sagen uns die Kontrollen?
  • Welche qPCR-Parameter kann ich als Qualitätskontrolle des Assays verwenden?
  • Linear Dynamic Range und Primer Efficiency
  • Ist ein Agarosegel zur Assayvalidierung notwendig?
  • Darf man Reagenzien innerhalb einer Versuchsreihe austauschen?
qPCR Troubleshooting (Beispiele, Modelle)
  • PCR-Inhibition
  • Welchen Einfluss hat die DNA/cDNA Konzentration?
  • Replikate (technisch/biologisch)
  • Niedrige Fluoreszenzwerte/Baseline
  • Was sagen Schmelzkurven über die Assayqualität?
  • Welcher Einfluss hat die Primer Konzentration?
Data Analysis
  • Verfügbare Software
  • Strategien / Modelle zur Datenauswertung
  • PCR-Effizienz pro Reaktion berechnen
  • ddCt
  • Relative Quantities
  • Effizienzkorrektur
  • ddCt vs. Relative Quantities

Zielgruppen

Angesprochen werden technische und wissenschaftliche Mitarbeiter aus der akademischen und industriellen Forschung, sowie Mitarbeiter aus der Qualitätkontrolle und Assayentwicklung, die nukleinsäure-basierte Verfahren anwenden.

Termine und Orte

Datum Preis
Mannheim, DE
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SG-Seminar-Nr.: 5532156

Termine

  • 17.11.2020

    Mannheim, DE

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